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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章當(dāng)我們提取核酸時,都發(fā)生了什么?

當(dāng)我們提取核酸時,都發(fā)生了什么?

更新時間:2021-04-13點擊次數(shù):2532

2020年初, “核酸檢測”的概念由于*的原因突然正式“出圈”,成為了一時之間大眾口中的熱詞。此中,自動化核酸提取設(shè)備由于操作簡單、通量高、速度快的優(yōu)點而迎來了罕見的廣泛追捧,那么,當(dāng)它究竟都實現(xiàn)了哪些工作呢?

 

有些小伙伴可能反手就是一個流程原理圖:

那更進一步的解釋呢?

重點來了!

裂解:通常裂解液中會含有洗滌劑,根據(jù)樣本的不同還會添加蛋白酶,用于裂解和溶解蛋白質(zhì);另外還有高濃度的離液鹽,如異硫氰酸胍,它能擾亂氫鍵,破壞核酸與水之間的結(jié)合,使核酸能夠與磁珠結(jié)合。

通過這里我們能夠理解:1.為什么裂解步驟經(jīng)常需要加熱;2.為什么裂解液會容易起泡;3.為什么裂解的步驟需要長時間的混合。

洗滌:洗滌液中通常含有較大比例的乙醇,一方面能降低溶液介電常數(shù)使核酸沉淀以更好的結(jié)合,另一方面能洗去殘留的鹽;有時候這里還會有部分離液鹽,用以去除上一步殘留的蛋白質(zhì)。

通過這里我們能夠理解:1.添加無水乙醇的作用;2.不同洗滌步驟的目的區(qū)別。

洗脫:由于在上一步中經(jīng)過了較大體積的乙醇,在正式洗脫磁珠之前通常會經(jīng)過“晾干”,充分利用乙醇的易揮發(fā)性,避免乙醇的殘留影響后續(xù)的實驗。當(dāng)乙醇被去除,核酸分子恢復(fù)親水性,在弱堿性的洗脫液中,核酸被輕易地溶解,從而從磁珠上被解放出來。

至此,完整的核酸提取流程就結(jié)束了,通過流程的清晰化,能夠更好地優(yōu)化試劑盒-儀器之間的磨合,縮短磨合時間,節(jié)約時間、人力與經(jīng)濟成本。

 

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